視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病（NMOSD）是一種主要累及青壯年人群，復(fù)發(fā)率和致殘率*的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘疾病。2019年9月27日NMPA批準了水通道蛋白（AQP4）抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）的上市，用于體外定量測定人血清中水通道蛋白抗體（AQP4 Ab）的含量。該試劑盒（RSR, AQP4 Ab Version 2）來自天津阿斯爾生物科技有限公司，注冊號：國械注進20192400461。
2021年12月中國免疫學(xué)會神經(jīng)免疫分會組織國內(nèi)專家重磅發(fā)布了2021版《中國視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病診斷與治療指南》（以下簡稱《指南》），在實驗室診斷方面，較前版有較大的補充，重申了AQP4-IgG在診斷中的重要性。AQP4-IgG是具有高度特異性的診斷標志物，特異度高達90%，敏感度約為70%。
小編重點梳理了2021版《指南》中關(guān)于實驗室診斷要點的更新：
指南解讀-抗體檢測方法
?指南
推薦使用基于細胞轉(zhuǎn)染的免疫熒光技術(shù)（cell based transfection immunofluorescence assay, CBA）或流式細胞術(shù)進行血清檢測。
解讀：
指南中所推薦的CBA和流式細胞術(shù)大多數(shù)為實驗室檢測方法，高度依賴檢測人員的操作水平（細胞轉(zhuǎn)染水平，不同轉(zhuǎn)染技術(shù)的選取，檢測結(jié)果判讀等）。
?指南
可使用酶聯(lián)免疫吸附試驗縱向監(jiān)測抗體滴定度對疾病進展和治療。
解讀：
2021版《指南》較2016年版明確了抗體定量檢測的意義，并充分肯定了ELISA法獲得的定量結(jié)果對制定臨床診療方案的輔助意義。
?指南
酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）靈敏度高，特異度有所降低。
解讀：
我們查閱了指南的征引文獻【53-55】，進一步分析文章的數(shù)據(jù)和結(jié)論來源。
靈敏度： 三例文獻中ELISA法的靈敏度最高，優(yōu)于間接免疫熒光(IIF)法、免疫組化(IHC)法和基于細胞的檢測(CBA)法。
特異性：綜合特異性排名：IIF=ELISA=CBA≥IHC
文獻【53】中ELISA法的特異性最高，優(yōu)于IHC法。
文獻【54】中ELISA法的特異性略低于基于組織的IIF法（IIF-tissue法），與基于細胞的IIF法（IIF-AQP4，CBA法）一致。
文獻【55】中ELISA法的特異性與參比方法基于組織的IIF法一致。
征引文獻詳解：
01 文獻【53】：S. Jarius等（2012）
入組樣本：共261例
● NMOSD疾病組（108例）：
66例視神經(jīng)脊髓炎（NMO），25例長節(jié)段橫貫性脊髓炎（LETM），14例復(fù)發(fā)性視神經(jīng)炎（ON），3例非長節(jié)段橫貫脊髓炎/視神經(jīng)炎（NETM/ON）
● 對照組（153例）：
109例多發(fā)性硬化（MS），39例其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病（OND）, 5例健康對照(HC)
檢測方法：
● ELISA法
RSR, AQP4 Ab Version 1
現(xiàn)款2代試劑盒全面優(yōu)于文中1代性能
檢測全部樣本（261例）
● 免疫組化法
檢測部分樣本（207例）
檢測結(jié)果（表1）
1. 靈敏度：
ELISA法靈敏度高。ELISA法靈敏度在下列疾病亞組（單發(fā)或多發(fā)癥狀患者）中均高于IHC法：50/66例(75.8%)NMO患者，17/25例(68%)LETM患者，3/14例(21.4%)ON患者，2/3例(66.7%)ON合并非廣泛性橫斷脊髓炎患者。在針對性更強的NMOSD患者中，同時接受雙方法學(xué)檢測的結(jié)果中ELISA法仍維持更高的陽性率（10例ELISA檢測單陽性，3例IHC檢測單陽性）。
2. 特異性：
數(shù)據(jù)證實ELISA法特異性高于IHC法：在對照組中，151/153例(98.7%)患者呈AQP4抗體陰性（ELISA法），116/118例（98.3%）患者呈AQP4抗體陰性（IHC法）。
3. 重復(fù)性：
ELISA在AQP4抗體檢測方面上具有很好的批內(nèi)和批間重復(fù)性。
4. 定量意義：
血清中AQP4抗體濃度與疾病活躍程度相關(guān)(p＜0.00001)。
表1 261例患者和對照的人口學(xué)、臨床和血清學(xué)結(jié)果
注：m =男性；f =女性；pLR =陽性似然比；nLR =陰性似然比；n.d.=不確定；n.a.=不適用
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02 文獻【54】：Yoon-Joo Kim等（2012）
入組樣本：共124例
● NMOSD疾病組（54例）：
9例NMO，32例視神經(jīng)炎（ON），13例橫貫性脊髓炎（TM）
● 疾病對照組（70例）：
10例MS（包括兩例視神經(jīng)脊髓OSMS），60例OND
檢測方法：
● 組織間接免疫熒光法(IIF-tissue)
小鼠小腦組織
● CBA法(IIF-AQP4)
轉(zhuǎn)染人AQP4的HEK293細胞 (EUROIMMUN, Germany)
● ELISA法
商用檢測試劑盒（DLD diagnostika GmbH, Germany）
檢測結(jié)果（表2）
1. 靈敏性：
ELISA法優(yōu)于IIF-tissue法和CBA法。
ELISA法在NMOSD疾病組（11/54，20.4%）中和NMO疾病亞組（5/9，55.6%）中陽性檢出率最高。
2. 特異性：
在疾病對照組中，三種方法的抗體陰性檢出例數(shù)僅相差一例，總體特異性相差不大（IIF-tissue法為68/70，97.1%；CBA法與ELISA法特異性一樣，為67/70，95.7%）。
表2 三種方法在不同疾病組患者中AQP4抗體的血清陽性率
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03 文獻【55】：Tampoia M等（2019）
入組樣本：共81例
● NMOSD疾病組（54例）：
24例NMO，24例LETM，13例ON，3例脊髓炎（Myelitis）
● 對照組（27例）：
17例MS，10例健康供血者（HS）
檢測方法：
● ELISA法
RSR, AQP4 Ab Version 2
全自動檢測系統(tǒng)（SkyLAB 752）
● 組織間接免疫熒光法（IIF-tissue）
基于靈長類組織
檢測結(jié)果（表3）
1. 方法學(xué)間一致性強：
ELISA檢測結(jié)果與參照方法IIF-tissue法的一致性達*。
2. 臨床準確度：
NMO患者中檢測AQP4抗體的靈敏度為83.3%，特異性為*。
3. 定量意義：
NMO患者的AQP4抗體中位數(shù)濃度高于LETM患者（p=0.00006）或其他NMOSD患者及對照組(p < 0.0001)。
4. 文章結(jié)論：
新款ELISA試劑盒在全自動化的系統(tǒng)上體現(xiàn)出較高的靈敏度和*特異性，精密度高（CV值?。?，可以提供客觀的定量結(jié)果。
表3 患者和對照組的人口統(tǒng)計學(xué)、臨床和血清學(xué)特征
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